DNA的提取设备 离心机 电泳设备 凝胶成像系统
1 实验前准备
用酒精棉球对实验操作台进行擦拭即可.
2 菌体收集
用1.5mlEP管对过夜培养的大肠杆菌进行菌体收集，收集两次约2.5ml过夜培养的菌液（有时根据菌液浓度适当调整）；取过夜培养的菌液，加入离心管中，使用常规台式离心机，12,000 rpm离心1 分钟，后倒掉上清，进行第二次收集，重复第一次实验操作；
3 菌体重悬
向留有菌体沉淀的离心管中加入250 μl 溶液P1（请先检查是否已加入RNaseA），使用200ul移液枪彻底悬浮细菌沉淀。注意：如果有未彻底混匀的菌块，会影响裂解，导致提取量和纯度偏低。
4 菌体裂解
向离心管中加入250 μl 溶液P2，及时温和地上下翻转3-4次使菌体充分裂解，要及时，是防止局部裂解。注意：温和地混合，不要剧烈震荡，以免打断基因组DNA，造成提取的质粒中混有基因组DNA 片断。此时菌液应变得清亮粘稠，所用时间不应超过5 分钟，以免质粒受到破坏。如果未变得清亮，可能由于菌体过多，裂解不彻底，应减少菌体量。
5 中和反应
向离心管中加入350 μl 溶液P3（主要是些NacooH，中和溶液2中的碱），立即温和地上下翻转3-4 次，充分混匀，此时将出现白色絮状沉淀。注意：P3 加入后应立即混合，避免产生局部沉淀。如果上清中还有微小白色沉淀，可再次离心后取上清。
6 柱子平衡
拿出吸附柱和收集管，将吸附柱套入入收集管中，向吸附柱CP3 中加入500μl 的平衡液BL，12,000 rpm (~13,400×g ) 离心1 分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。（请使用当天处理过的柱子）
7 离心去除沉淀
将第五步骤中和反应后的溶液，用12,000 rpm (~13,400×g )离心15 分钟去除菌体裂解后的残留蛋白和基因组DNA，时其在离心管底部形成沉淀，质粒分布于上清液。
8 质粒过柱纯化
将上一步收集的上清液转移到吸附柱CP3 中 （吸附柱放入收集管中），注意尽量不要转移出沉淀。12,000 rpm (~13,400×g)离心30-60 秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CP3 放入收集管中。
9 漂洗
向吸附柱CP3 中加入600 μl 漂洗液PW（检查是否已加入无水乙醇），12,000 rpm (~13,400×g )离心30-60 秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CP3放入收集管中。（一般漂洗两次）。
10 空甩
一般在漂洗后要进行一次的空甩，目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，具体是12,000 rpm (~13,400×g) 空甩离心2 分钟，后置于室温放置数分钟。
11 洗脱DNA
取干净的离心管，将吸附柱CP3 置于干净的离心管中，向吸附膜的中间部位滴加50μl事先温浴的洗脱缓冲液，室温放置2 分钟，12,000 rpm (~13,400×g) 离心1 分钟将质粒溶液收集到离心管中。
12 琼脂糖电泳检测提取质粒质量
事先配制好1%浓度的琼脂糖电泳凝胶。取3ul上步骤提取的质粒，点样，200V电压 电泳15min，后于成像系统观察。
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